根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱，在进行不同的检测时会用到不同的色谱，当然其在检测检测计量中是很常见的。可是液体色谱在使用的过程中有很多的注意事项，有时就连使用过很长时间的操作员也会操作失误，引发仪器故障，今天通化市计量校准公司小编就来为大家主要介绍一下液体色谱使用中常见的错误。

　　一、流动相不过滤

　　因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。

　　二、使用后没有及时清洗泵

　　流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。

　　因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

　　三、流动相走空

　　泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。

　　四、没有流动相流出，又无压力指示怎么办？

　　可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5mL/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50mL针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。

　　五、压力和流量不稳了？

　　原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。

　　六、压力为啥过高或过低？

　　可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。

　　在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：

　　在液相色谱中对组分复杂的样品采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

　　七、梯度洗脱的流动相选择不当

　　要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。

　　当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。

　　八、忽略了空白梯度洗脱

　　梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

　　九、忽略了溶剂混合所带来的粘度变化

　　混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。

　　以上就是通化市计量校准公司小编介绍的全部内容，液体色谱的测量十分准确，但是在使用的过程中容易出现的操作失误或者操作不当也有很多，不要以为已经使用年就在操作过程中掉以轻心。大家要认真的阅读上文介绍的几点，避免在操作中出现失误。